稀有放线菌噬菌体ΦSCU20的分离及其生物学特性的研究

以稀有放线菌小单孢菌40027菌株为指示菌,从土壤中分离得到1株新噬菌体,命名为ΦSCU20。在测试的9株放线菌菌株中,仅能感染小单孢菌40027菌株和A-M-01菌株。电镜观察显示噬菌体ΦSCU20由多面体的头部和尾部组成。噬菌体ΦSCU20生物学特性研究表明,噬菌体ΦSCU20形成噬菌斑时培养基中适宜的Ca2+和Mg2+浓度分别为8 mmol/L和20 mmol/L;噬菌体ΦSCU20在储存液中适宜的pH值为8;噬菌体ΦSCU20不耐高温,经40℃保温30 min后,其活力降低到48.65%,经60℃保温30 min后,则完全失活;噬菌体ΦSCU20基因组特性研究表明,该噬菌体的基因组为双链DNA,基因组大小约为65 kb。     

二甲基亚砜对高GC含量小单孢菌基因组DNAPCR扩增的影响

研究了不同浓度二甲基亚砜对小单孢菌基因组DNA PCR扩增的影响,结果表明,在以小单孢菌基因组DNA为模板的PCR扩增体系中,加入终浓度为2.5%或4.0%的二甲基亚砜(DMSO)有利于PCR扩增.     

小单孢菌227所产生物活性物质的抑菌特性研究

[目的]研究小单孢菌227所产生物活性物质的抑菌特性。[方法]分别从小单孢菌227摇瓶发酵液的上清液和菌丝体的乙醇提取液中提取生物活性物质,分别对其进行抑菌活性的测定。[结果]小单孢菌227所产生物活性物质对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌均有较强的抑制作用。该菌所产抗菌活性物质是既有脂溶性又有水溶性的多组分物质。用乙醚萃取脂溶性物质的萃取效果分别优于正丁醇、乙酸乙酯和正乙烷。对小单孢菌227菌丝体乙醇提取液与离心上清液抑菌能力比较结果表明小单孢菌227所产生物活性物质属胞外产物。[结论]小单孢菌227所产生物活性物质具有较强抑菌效果。     

TAIL-PCR方法扩增稀有放线菌小单孢菌中ΦC31的attB序列研究

[目的]为了研究链霉菌噬菌体ΦC31在小单孢菌40027菌株中的整合位点序列。[方法]以20 ng整合质粒pSET152的小单孢菌40027菌株基因组DNA为模板,利用3个特异性巢式引物(PF1、PF2和PF3)与随机引物AD2,通过热不对称交错PCR(TAIL-PCR)扩增稀有放线菌小单孢菌中ΦC31的attB序列,用1%琼脂糖凝胶电泳来检测扩增产物的大小。[结果]扩增结果表明,第三轮扩增产物250 bp左右的条带比第二轮对应带略小,第二轮扩增产物对应带比第一轮对应带略小,与3个特异性巢式引物预期扩增结果相符,第三轮扩增产物250 bp左右那一条带为阳性带,经回收后,进行克隆并测序。序列分析表明:该阳性带包含ΦC31在小单孢菌40027菌株中的attB序列。[结论]TAIL-PCR方法为attB序列的克隆提供了一种简便、高效的新方法。     

Extraction of humic-β-glucosidase fractions from soil

Humic compounds with -glucosidase activity were extracted from soil using tetrasodium pyrophosphate as extracting solution. Mixture of soil samples with 0.01 M pyrophosphate in a ratio of 1:5 (w/v), adjustment to pH 7.0–7.3, extraction for 18 h with reciprocating agitation, and bacteriological filtration after centrifugation were the optimum conditions for extraction of the -glucosidase complexes. Otherwise, experimental conditions for extraction indicated that the concentration and pH of pyrophosphate were the factors with the most influence on enzymatic extraction yields. The results indicated that the -glucosidase was extracellular and associated with soil humates.     

紫海胆肠道放线菌Micromonospora sp．HDa2次生代谢产物的研究

采用常规色谱分离技术对分离自健康紫海胆肠道的稀有放线菌Micromonospora sp．HDa2发酵液的化学成分进行分离纯化,并以波谱技术确定化合物的结构。结果表明：从放线菌Micromonospora sp．HDa2的发酵液乙酸乙酯提取物中分离鉴定了6个已知结构的环二肽化合物．分别为环（苯丙-缬）二肽（1）、环（苯丙-亮）二肽（2）、环（苯丙-异亮）二肽（3）、环（苯丙-苯丙）二肽（4）、环（亮-亮）二肽（5）和环（亮-异亮）二肽（6）。对紫海胆肠道放线菌进行分离。结果发现以上化合物均是从Micromonospora属放线菌中发现的。     

外源基因对小单孢菌40027菌株产生抗生素的影响

研究了外源基因对小单孢菌40027菌株产生抗生素水平的影响。结果表明:整合了质粒pSET152和质粒pHZ1904的小单孢菌40027菌株比原始菌株产生福堤霉素A的产量低,在产素时间上缩短;整合了质粒pSET152和pHZ1904小单孢菌40027菌株之间在产素水平和产素时间上没有显著差异。表明整合了质粒pSET152和pHZ1904的小单孢菌40027菌株与原始菌株在产素水平和产素时间上的差异是由质粒pSET152造成的,dnd基因簇对小单孢菌40027菌株的产素水平和产素时间没有影响。     

几株生产用小单孢菌质粒DNA的分离、鉴定和功能的研究

以庆大霉素生产菌——绛红小单孢菌（Micromonospora purpurea,M.p）,小诺霉素、庆大霉素生产菌——棘孢小单孢菌（Micromonospora echinospora,M.e）和西索霉素生产菌——伊尼奥小单孢菌（Micromonospora inyoensis,M.i）为研究材料,对其遗传性状特别是质粒DNA进行了分离、鉴别并对其功能进行了研究.结果表明：三株生产用小单孢菌质粒DNA与该菌产生孢子、色素有关,而与产生抗生素无关.说明这三株生产用小单孢菌产生抗生素的基因在染色体DNA上,从而为研究、改造这三株生产用小单孢菌染色体DNA遗传性状和提高产量奠定了基础.     

Screening of Prolific Micromonospora carbonacea in Antibiotics Production by Sodium Nitrite Mutagenesis

[Objective] The purpose of the study is to breed Micromonospora car- bonacea highly producing antibiotics and then to improve the antibiotic production. [Method] Sodium Nitrite mutagenesis, combined with rifampicin resistance screening, was used in mutation breeding of M. carbonacea highly producing antibiotics from the strain of M. carbonacea JXNU-I. [Result] The overproducing strain JXNU-1-16- Y65 was screened with the production of antibiotics 266.05% more than that of the original strain. [Conclusion] The effectiveness of sodium nitrite mutation in breeding microorganisms highly producing antibiotic was proved, and the study may lay the foundation on further development and application of the antibiotic from M. car- bonacea JXNU-1.     

一株产庆大霉素B的绛红小单孢菌的分类鉴定

通过对一株自行筛选的野生稀有放线菌菌株的分类地位进行了研究,鉴定其分类地位。采用常规方法进行分离培养,以形态学特征、培养特性、生理生化特征及分子生物学等方法对其进行分类鉴定。将所分离的菌株进行摇瓶发酵,将发酵液上清液采用HPLC进行组分检测。该菌株菌落微黄色或浅棕色;产红色色素,气生菌丝不发达,基内菌丝直径平均0.4~0.8μm,产单孢子,生理生化特征与绛红小单孢菌相似,16 S rDNA测定结果与Micromonsopora sp.(EU214948)序列同源性达97%,与M.purpurea(X92595)最为接近。其发酵产物中含有庆大霉素B、小诺霉素和庆大霉素。鉴定该菌株为产庆大霉素B的小单孢菌属绛红小单孢菌(Micromonos-pora purpurea)。